为了让更多的朋友认识霍山石斛（米斛）这一中华瑰宝，米小斛决定为朋友们搞一个米斛科普系列，专门为朋友们分享一些米斛的国内外科学研究，从科学的角度来解读米斛。

米小斛今天开始分享系列的第一篇，关于米斛抗炎活性的研究，米小斛分享的是一篇发表在《Natural Product Research》上的关于米斛抗炎及活性成分（联苄类物质）筛选分离的文章，文章结果表明：米斛具有抗炎活性（抗炎作用通过抑制NO、TNF-α、和IL-1β的产生，同时降低iNOs、TNF-α和IL-1β的mRNA表达水平来实现），并分离出了4种具有抗炎活性的联苄类物质（4种成分为：3-羟基-5-甲氧基联苄、3-羟基-5,4’-二甲氧基联苄、dendrocandin U和dendrocandin B）。文章题目截图，见图1。

图1 文章题目截图

一、文章摘要部分

图2 文章原文摘要截图

文章摘要部分表达了米斛的药用历史久，长期用于预防炎症等各种疾病。文章的研究目的是解释米斛茎对LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞模型的抗炎作用并分离出具有抗炎活性的化合物。文章研究结果表明，米斛茎的醇提取物可显著抑制LPS诱导产生的NO（一氧化氮）、TNF-α（肿瘤坏死因子α）、和IL-1β（白细胞介素1β）。文章作者通过生物活性筛选系统，首次从米斛茎中分离出了4个联苄类化合物（1-4），见图3。抗炎试验显示，联苄类化合物（1-4）可显著抑制LPS（脂多糖）诱导的巨噬细胞中NO的产生；定量RT-PCR分析结果显示，联苄类化合物（1-4）可显著降低iNOs（诱生型一氧化氮合酶）、TNF-α和IL-1β的mRNA表达水平。综合表明，米斛茎的醇提取物和联苄类化合物（1-4）具有预防治疗炎症的作用。

图3 米茎中的具有抗炎活性的4种联苄类物质

二、文章前言简介

文章前言简介部分，指出米斛非常珍稀，且仅分布在中国安徽省霍山县（也说明了米斛的道地产地在安徽霍山）。米斛茎长期作为具有功效的食物，常用于改善咽喉炎症、滋养胃和改善免疫功能衰退。现在大多数研究都集中在霍山石斛的大分子多糖上，多糖具有多种生物活性，如免疫调节、抗白内障、护肝等，而米斛中具有生物活性的小分子化合物研究较少。因此文章作者，想通过科学研究来解释米斛的抗炎活性及其具有抗炎活性的化合物。文章研究结果解释了米斛茎的醇提取物对于LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞的抗炎作用，同时对醇提取物做进一步的分析研究，分离出了4个具有抗炎活性的联苄类化合物。文章原文简介截图，见图4。

图4 文章原文简介截图

三、文章结果与讨论

在炎症区域，巨噬细胞可由细菌细胞壁成分诱导产生大量的NO、TNF-α和IL-1β，三者被认为是重要的促炎介质和细胞因子（也就是说NO、TNF-α和IL-1β过多，会引发炎症）。如图5，LPS诱导巨噬细胞产生的NO、TNF-α和IL-1β可通过米斛醇提取物被抑制。当米斛醇提取物的浓度达到100 μg/mL时，与模型组比较，NO、TNF-α和IL-1β的水平分别下降了87.8％、45.6％和61.3％。上述数据表明，米斛醇提取物具有抗炎作用。

数据表示为平均值±SD（n=3）。###p<0.001，与正常相比；单独与LPS相比，**p<0.01和***p<0.001。

图5 DH和DH-70Et对LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞的细胞活力（A）、NO（B）、TNF-α（C）和IL-1β（D）的影响。

为了进一步分离筛选米斛中的抗炎活性成分成分，文章作者通过大孔树脂（D101）色谱法分离米斛醇提取物，得到5个截留部分，其中DH-70Et级分对LPS诱导的巨噬细胞中NO、TNF-α和IL-1β生成的抑制作用较米斛醇提取物更显著（图5）。当DH-70Et级分浓度达到100 μg/mL时，与模型组比较，NO、TNF-α、和IL-1β水平分别下降了96.1%，44.3%和82.5％。因此文章作者把DH-70Et级分被确定为活性级分。通过抗炎活性引导分离，从DH-70Et级分中分离获得4个联苄化合物，通过1D-NMR（一维核磁共振）和MS（质谱）并结合文献报道，4种化合物被鉴定为3-羟基-5-甲氧基联苄（1）、3-羟基-5,4’-二甲氧基联苄（2）、dendrocandin U和dendrocandin B（图3和图8），并且这4种化合物都是首次从米斛中分离出来。

为了验证抗炎作用，通过4种化合物对LPS诱导的巨噬细胞中NO生成的影响来进行分析。如图6，4种化合物对LPS诱导的NO的生成产生了显著的抑制作用。当联苄化合物（1-4）的浓度达到80 μM时，与模型组比较，NO的表达水平分别下降了83.5％，87.2％，100.1％和34.8％。同时，LPS诱导的iNOs、TNF-α和IL-1β的mRNA的表达水平也被这4种化合物显著的抑制。尤其是化合物3，当其剂量达到80 μg/mL时，与模型组比较，iNOs、TNF-α和IL-1β的mRNA表达水平分别下降了99.1%，69.3%和97.2％。研究结果说明，分离的联苄类化合物（1-4）具有显著的抗炎作用。

数据表示为来自三个独立实验的平均值±SD。###p<0.001与正常相比；单独与LPS相比，*p<0.05，**p<0.01和***p <0.001。

图6 联苄类化合物（1-4）对LPS诱导的巨噬细胞NO（A）产生和iNOs（B）、TNF-α（C）和IL-1β（D）mRNA表达的影响。

数据表示为平均值±SD（n = 3）

图7 联苄类化合物（1-4）对RAW 264.7巨噬细胞活力的影响。

图8 四种联苄类化合物的结构

四、文章结论

综上所述，文章研究证明了米斛茎的醇提取物能够显著抑制LPS诱导的巨噬细胞中的炎症介质和细胞因子的产生（也即表明米斛是有抗炎作用的）；进一步分离出了4个具有显著抗炎活性的联苄类化合物（1-4），具体结构见图8。文章作者也表明，未来在抗炎药物的开发中米斛是比较有潜力的原材料。

米小斛总结：米斛具有很好的抗炎活性（是不是想起了米斛的清咽作用），其中的3-羟基-5-甲氧基联苄（1）、3-羟基-5,4’-二甲氧基联苄（2）、dendrocandin U和dendrocandin B这4种联苄类物质具有更强的抗炎活性。

参考文献

Li Q M, Jiang H, Zha X Q, et al. Anti-inflammatory bibenzyls from the stems of Dendrobium huoshanense via bioassay guided isolation[J]. Natural product research, 2018: 1-4.

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